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层析柱的操作方法

以中压柱层析法提取分离冬凌草甲素为例：

　　1.吸附剂的处理及柱子装填

　　将一定量薄层层析硅胶装入搪瓷盘置于烘箱中，于105。C活化2H后，取出放置室温即可装柱。柱子采用干法填充，填满整个柱体，不留死体积，密封后用柱塞式计量溶剂泵按一(5：95)比例泵入溶剂，至溶剂流出止。

　　2.上样

　　将冬凌草的乙醇提取物400G用适量溶解，泵入中压柱柱头，然后泵入1000RID。

　　3.洗脱

　　以一定比例的一为洗脱液，60ML/MIN的流速进行梯度洗脱，柱的使用压力为2～ 3KG/C 。按每份500ML收集，TLC检识展开剂一(2：8)，显色剂5%香草醛乙醇液

　　至洗脱完全，相同流份合并，回收溶剂。将冬凌草甲素流份合并蒸干。加入适量热溶后自然放置，析出结晶，为冬凌草甲素。

　　4.层析柱再生、平衡

　　有效成分经TLC检识全部流出后，用纯5000ML再生，一(5：95)平衡后，可再次上样，反复使用(使用次数随原料不同而异，一般可连续使用2—6个月以上)。

　　5.重结晶

　　冬凌草甲素结晶析出完全后，减压过滤，然后用少量洗涤(洗涤液保留，作下次热溶冬凌草甲素用)。将冬凌草甲素再用适量热溶后放置，结晶再次析出，待结晶完全后，抽滤，用少量洗涤，将结晶室温下晾干后置真空干燥箱中，35度真空干燥至恒重。密封于瓶中，置干燥器中保存。

　　6.薄层层析分析

　　取适量冬凌草甲素对照品及由上述方法得到的冬凌草甲素样品溶解后点于同一硅胶G薄层板上，以一(8：2)为展开剂进行展开，5% 香草醛乙醇液显色，于105。C烘至斑点清晰。表明在该展开系统下，冬凌草甲素样品和对照品都具有相同的RF值，并呈现出同样的蓝绿点，在制备的冬凌草甲素样品中，没有杂质斑痕。

大孔吸附树脂的结构及吸附原理

大孔吸附树脂的结构包括化学结构和物理结构。通过带有各种功能基团的单体或聚合物进行功能基反应,可以得到不同化学结构的吸附树脂。而大孔吸附树脂的物理结构主要是孔结构,它是在合成时加入惰性的制孔剂,待网络骨架固化和链结构单元形成后,再用溶剂萃取或水洗蒸馏将其去掉,就留下了不受外界条件影响的孔隙。

大孔吸附树脂是集筛选和吸附于一体的多孔材料,对于吸附质的吸附主要是物理吸附。物理吸附的实质是基于树脂表面上的原子力场不饱和而有表面能,因而可以吸附某些分子以降低表面能;吸附作用主要是范德华力或氢键绑定的结果,吸附过程取决于温度、压强、表面积的大小,与表面的微观结构关系不大。吸附剂从溶液中吸附溶质分子后,溶液的浓度将降低,而被吸附的分子将在固体表面上浓聚,其结果一般是引起体系内放热和自由能的下降。

树脂装填使用后的停运储存

树脂装填正常使用后，如因系统检修或季节性停产等原因停用，需要对树脂进行充分再生处理与水洗后，再进行密封保存（为防止树脂长时间储存而染菌，很多情况下会将树脂保存于10%的N***盐水中或10%的N*** + 2%的NaOH碱盐水中）。

注水保存防失水

对于短时间储存在树脂柱内的树脂，应对树脂进行充分再生处理与水洗后，向柱内注入一定量的清洁去离子水对树脂进行保存，须保持一定的液面层高度（液面层稳定高于树脂床层2cm以上）。